Estandarización de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa para la detección y caracterización de Helicobacter pylori presente en muestras de tejido gástrico humano, utilizando el gen 165 rADN y el gen asociado a citotoxina

Abstract

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es uno de los métodos más utilizados para la detección de microorganismos de difícil cultivo e identificación, ya que permite, no sólo localizar el patógeno sino también genotipificarlo a partir de amplificación directa sobre la muestra, evitando aislamientos previos y utilizando cantidades mínimas de ADN. Conociendo que Helicobacter pylori es un microaerófilo de gran importancia que se encuentra asociado a la mucosa gástrica, y que debido a sus características es muy difícil de aislar, se estandarizó una PCR para la detección y caracterización del patógeno presente en biopsias de tejido gástrico, a partir del gen 16S rADN (especie específico) y el gen asociado a citotoxina (cagA). Para esto se eligieron protocolos descritos por otros autores, los cuales fueron estandarizados en laboratorio utilizando una cepa de referencia de H. pylori (NCTC11637), genotipificada como vacA s1/m1, cagA+ y babA2+. La obtención de resultados óptimos se dio después de la realización de titulaciones de cloruro de magnesio, para ambos genes...