Efecto de diferentes cationes divalentes sobre la eficiencia del proceso de transformación por choque térmico sobre NEB E.coli 5-[alfa]

Abstract

"Los procesos de transformación presentan retos asociados a la difícil inserción del material genético al citoplasma bacteriano, ya que la membrana celular, así como el esqueleto del ácido nucleico, está compuesta por grupos fosfatos con carga negativa. Para resolver esto, el CaCl2 es implementado con el fin de disminuir la repulsión electrostática y promover la formación de poros en la membrana. El mecanismo de acción especifico sigue siendo tema de discusión científica. El objetivo principal de este trabajo es el de analizar los efectos de diferentes cationes divalentes (Sr2+, Ca2+, Mn2+, Mg2+ y Zn2+) sobre la eficiencia de transformación en la cepa NEB E. coli 5-? usando el vector pUC19, así como establecer algún indicio de cuál es la interacción principal del catión. Se pudo observar que el Ca2+ y Sr2+ fueron los cationes con mayor eficiencia de transformación (ambas eficiencias alrededor de las 78000 CFU/æg pUC19)." -- Tomado del Formato de Documento de Grado.

"Transformation processes possess different challenges associated to the complicated insertion of genetic material in the bacterial cytoplasm, since both the cell membrane and the skeleton of the nucleic acid present negatively charged phosphate groups. To solve this issue, CaCl2 is used so that the electrostatic repulsion is diminished and to promote pore formation on membrane. The mechanism of action remains as a topic of scientific discussion. The main objective of this work is to analyze the effect of different divalent cations (Sr2+, Ca2+, Mn2+, Mg2+ y Zn2+) on the strain NEB E. coli 5-? using pUC19 vector, as well as to establish a hint of which is the main interaction of the cation. It could be seen that Ca2+ and Sr2+ had the highest values of transformation efficiency (both around the 78000 CFU/æg pUC19). Zn2+ was completely ineffective, due to its alleged inhibitory activity at high concentrations and the precipitation of zinc oxychlorides in the aqueous solution of ZnCl2." -- Tomado del Formato de Documento de Grado.