Ensayo de clonación de la proteína dihidropirimidina deshidrogenasa (DHPD) de papa en el vector pGBKT7

Abstract

La proteína dihidropirimidina deshidrogenasa (DHPD) es la primera enzima involucrada en la ruta del catabolismo de pirimidinas. Se ha observado que la DHPD se sobreexpresa en plantas de Oryza sativa (arroz) sometidas a condiciones de sequía, por lo que se piensa que esta proteína y la ruta de pirimidinas son importantes para la resistencia a factores abióticos. Igualmente, se conoce que en mamíferos la estructura de la DHPD es bastante compleja pero en plantas el tamaño de esta enzima es considerablemente menor y tiene ausentes los sitios de unión para tres cofactores que se requieren para catalizar reacciones. Es por esto que se ha estudiado la posibilidad de que la DHPD en plantas interactúe con otras proteínas que aún no han sido identificadas, que permiten que esta enzima realice de manera adecuada sus funciones. En este trabajo, se realiza la clonación de la proteína DHPD en el vector de expresión pGBKT7, con el objetivo de usar este vector para realizar un Yeast-two-hybrid, técnica que permite estudiar las interacciones proteína- proteína. Para la clonación, se amplifico la secuencia de la proteína del plásmido DHPDt-pET15b para luego insertarla en pGBKT7 mediante ligación.