Purification and measurement of enzymatic activity and kinetic parameters for homoserine dehydrogenase as therapeutic target in Malassezia furfur
2018
Malassezia genus is composed by 17 different yeast species. It is a common yeast in the skin microbiota and it is often a commensal fungi incapable to cause damage in the host. However, some species are related with cutaneous and systemic diseases. Previous studies reported some target enzymes to inhibit the growth of Malassezia spp., one of those is homoserine dehydrogenase. For that reason, the present research sought to purify and quantify the enzymatic activity of homoserine dehydrogenase with the future aim to prove the inhibition of Malassezia furfur growth by the inhibition of the enzyme. To carry out the purification and measurement of enzymatic activity, E. coli with a specific his-tagged clone of homoserine dehydrogenase was sow in LB agar. The clone expression was induced by IPTG 2mM in the third hour of incubation and then the culture was purified using 2 different techniques: affinity chromatography and dynabeads... El género Malassezia está compuesto por 17 diferentes especies de levaduras. Este organismo es común en la microbiota de la piel y a menudo es un hongo comensal incapaz de causar daño en el hospedero. Sin embargo, algunas especies de Malassezia están relacionadas con enfermedades cutáneas y sistémicas. Estudios previos han reportado posibles enzimas blanco para inhibir el crecimiento de Malassezia spp., una de ellas es la enzima homoserina deshidrogenasa. Por tal razón, el presente trabajo busca purificar y cuantificar la actividad enzimática de homoserina deshidrogenasa con el objetivo futuro de probar la inhibición del crecimiento de Malassezia furfur mediante la inhibición de dicha enzima. Para llevar a cabo la purificación y medición de actividad enzimática se sembró E. coli en agar LB cuyo genoma contenía un clon codificante para homoserina deshidrogenasa y colas de histidina. La expresión del gen fue inducida con IPTG 2mM en la tercera hora de incubación...
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